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1．1原理植酸酶能夠分解值酸，釋放出無機(jī)磷。選用植酸鈉為酶的作用底物，通過測定無機(jī)磷的釋放量可以計(jì)算酶活。目前植酸酶酶活的測定方法主要有4種，其中釩鉬磷法具有較高的權(quán)威性。該方法是Gist－Brocades和BASF公司在1991年提出的，其原理是利用植酸酶水解植酸鹽釋放無機(jī)磷，通過加入酸性鉬一釩試劑，使水解反應(yīng)停止，同時(shí)與水解釋放出來的無機(jī)磷產(chǎn)生顏色反應(yīng)，形成黃色的釩鉬磷絡(luò)合物，在415nm波長下測定磷的含量。以標(biāo)準(zhǔn)磷溶液（或標(biāo)準(zhǔn)植酸酶）為參照，計(jì)算酶活。該方法于1994年列入AOAC，我國已將此法的測定結(jié)果作為審批商品植酸酶注冊許可證和驗(yàn)收產(chǎn)品的法定商檢依據(jù)。1．2 操作方法1．2．1 試劑1．2．1．1 稀硝酸溶液量取100ml濃度為65％的濃硝酸，200ml蒸餾水混合。1．2．1．2 鉬酸銨試劑稱取100g鉑酸鐵，溶解在800ml蒸餾水中，再加入10ml 25％的氨水，定容至 1000ml，儲介在暗處，保存期8周。1．2．1．3 釩酸銨試劑稱取2.35g釩酸銨NH4VO3。，溶解在 400ml水中，預(yù)熱至55℃，加人20ml稀硝酸，定容至1000ml儲存在暗處，保存期8周。1．2．1．4 釩鉬終止液取鉬酸銨溶液和釩酸銨溶液各50ml，混合，在加入100ml稀硝酸，混合，儲存在暗處，該溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。1．2．1．5 醋酸緩沖液（pH值為5.5）稱取三水醋酸鈉30g和二水氯化鈣0.167g，溶解在約500ml蒸餾水中用冰醋酸調(diào)解pH值至5.5，定容至1000ml，保存期1周。1．2．1．6 10％氯化鈣溶液稱取100gCaCl2。·2H20，加蒸餾水溶解，定容至1000ml，室溫儲藏。1．2．l．7 植酸溶液（底物）。稱取1．4g植酸鈉，溶解在200ml醋酸緩沖液中，在常溫下用稀釋的冰醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至5.5，定容至250ml（植酸鈉是無水的，Sigma

公司生產(chǎn)，分子量為1104，最終植酸鈉的摩爾濃度為5.1mM），該溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。1．2．1．8 磷酸儲備液稱取682mgKH2PO4（經(jīng)105℃烘干至恒重）溶解在100ml醋酸緩沖液中。0℃－ 5℃保存。1．2．1．9 10mM標(biāo)準(zhǔn)磷酸溶液精確吸取10ml磷酸儲備液，用醋酸緩沖液稀釋至50ml，制成10mM磷酸溶液。該試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用。1．2．2樣品酶活的測定稱取4g待測樣品，用小磨或研缽磨成細(xì)粉。加入50ml蒸餾水，再加 1.6ml10％氯化鈣溶液，攪拌溶解60min，使酶蛋白充分溶出。吸取10ml，用小型臺式離心5min轉(zhuǎn)速為3 000rpm），做4個(gè)平行樣。離心結(jié)束后各吸取1ml，分別加入到4支試管中（2支做酶活測定，另2支做空白）。同時(shí)再準(zhǔn)備4支試管，其中2支各加入1ml10mM的標(biāo)準(zhǔn)磷酸溶液，另 2支試管中各加入lml的醋酸緩沖液。酶樣液、標(biāo)準(zhǔn)磷酸溶液和緩沖液，均在t＝0時(shí)加入3ml植酸底物，37℃水溶，在t＝60min，各加人2ml反應(yīng)終止液，混合，測定各自的OD415?？瞻讟釉趖＝0時(shí)加入2ml反應(yīng)終止液，再加入3ml植酸底物，37℃恒溫水浴60min以后測定其OD415。