日韩激情av在线|久操精品视频|国产精品乱码久久|www.五月婷婷.,欧美激情A片ⅩXXⅩ,国产精品视频专区,99在线精品免费视频

1．1原理福林試劑在堿性條件下可被酚類化合物還原呈藍色反應(yīng)（鉬藍和鎢藍的混合物）。由于蛋白質(zhì)分子中有含酚基的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等），它使蛋白質(zhì)及其水解產(chǎn)物呈上述反應(yīng)，利用這個原理可以測定蛋白酶活力的強弱。以酪蛋白為作用底物，在一定pH值和溫度下，同酶液反應(yīng)，經(jīng)一段時間后加入三氯乙酸，終止酶的反應(yīng)，并使殘余的酪蛋白質(zhì)沉淀，同水解產(chǎn)物分開。經(jīng)過濾后取過濾液（含蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的三氯乙酸溶液），用Na2C03堿化，再加入福林試劑使之發(fā)色。藍色反應(yīng)的強弱與過濾波中蛋白水解產(chǎn)物的量成正比例，而水解產(chǎn)物的量又同酶活力成正比。因此，根據(jù)藍色反應(yīng)的強弱可以計算出蛋白酶的活力。1．2操作方法1．2．1 試劑1．2．1．l福林試劑于2000ml磨口回流裝置內(nèi)加入鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O）100g，鉬酸鈉（NaMoO4·2H2O）25g。水700ml，85％的磷酸50ml，濃鹽酸100ml，文火回流10h，加入硫酸鋰（Li2SO4）150g，蒸餾水50ml，混勻取去冷凝器，加入幾滴液體溴，再蒸沸15min，以驅(qū)逐殘溴及除去顏色，溶液應(yīng)呈黃色。若溶液有綠色，需再加數(shù)滴液溴，再蒸沸除去，冷卻后定容至1000ml，過濾，置于棕色瓶中保存，此溶液使用時加2倍蒸餾水稀釋。1．2．1．2 0.4mol／l的TCA溶液稱取三氯乙酸65.4g，加水定容至1000ml。1．2．1．3 0.8mol／l的碳酸鈉溶液稱取無水碳酸鈉84.8g，加水溶解，定容至1000ml。1．2．1．4 pH值為3.6的醋酸緩沖液稱取NaAc·3H20 16g與268ml濃度為6mol／l的醋酸溶液混合，稀釋定容至1000ml。1．2．1．5 2％酪蛋白溶液稱取干酪索20g，加入0.lmol／l的氫氧化鈉20ml，在水浴中加熱溶解，然后用pH值為3.6的醋酸緩沖液定容至10