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l 原理纖維素酶是水解纖維素生產(chǎn)葡萄糖及纖維二糖的一類酶的總稱。包括C1酶、CX酶及纖維二糖酶。C1酶使天然纖維素晶體分鏈，成為直鏈纖維素。CX酶不能水解天然纖維素，但能分解直鏈纖維素β-1，4糖苷鍵生成纖維二糖。纖維二糖經(jīng)過纖維二糖酶作用生成葡萄糖。測(cè)定葡萄糖的方法很多，比較簡(jiǎn)單的方法可以采用3，5-二硝基水楊酸法（簡(jiǎn)稱DNS法）。3，5-H硝基水楊酸是一種氧化劑，能與還原糖作用，使硝基還原成氨基，溶液變?yōu)槌壬Ｔ谝欢ǖ倪€原糖濃度范圍內(nèi)，橙色的深度與還原糖的濃度成正比，據(jù)此可以推算出纖維素酶的活力。但是不同來源的纖維素酶對(duì)不同的天然纖維素的分解能力也不同，即使是同一種酶，對(duì)不同的天然纖維素的分解能力也不同。為了統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，目前通常以羧甲基纖維素鈉鹽（簡(jiǎn)稱CMC）作為纖維素酶作用的底物。但需要指出的是CMC無論在結(jié)構(gòu)上還是在性質(zhì)上都不同于天然纖維素，天然纖維素不溶于水，而CMC有很強(qiáng)的親水性，非常容易被纖維素酶分解。在相同條件下，同一種纖維素酶分解CMC所產(chǎn)生的還原糖遠(yuǎn)大于水解天然纖維素所產(chǎn)生的還原糖。因此CMC酶活力只能代表CX酶的活力，而且它的數(shù)值總是比較高的，只能供作參考。1．1 操作方法1．1．1 試劑1．1．1．l 二硝基水楊酸試劑稱取酒石酸鉀鈉91g，溶于500ml水中，再依次加入3，5-二硝基水楊酸3．5g，NaOH2Og，加熱攪拌、溶解，再加入重蒸酚2.5g，無水亞硫酸鈉2.5g，加熱攪拌、溶解，冷卻后定容至 1000ml。儲(chǔ)棕色瓶中，放置一周后使用。1．1．1．2 pH值為4.6的檸檬酸緩沖濃濃度為0.1mol／l的檸檬酸溶液26．7ml和濃度為0.2mol／l的磷酸氫二鈉溶液23．3ml，混合后加水稀釋到1000ml。1．1．1．3 pH值為5.0的磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖液取濃度為0.2mol／l的磷酸氫二納溶液25．7ml和濃度為0.1mol／

l檸檬酸溶液24.3m1，混合后加水稀釋至 1000ml。1．1．1．4 羧甲基纖維素鈉鹽溶液稱取CMC 1g，加水1000ml，在水浴中加熱溶解，再加入20mlpH值為5.0的磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖液和 40ml水，混勻。1．2．1．5 500μg／ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液稱取分析純葡萄糖0.5g（在105℃干燥至恒重），加蒸餾水溶解，定容至 1O00ml。1．2．2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線配制濃度（單位：μg／ml）分別為：O、40、80、100、160、200、240的葡萄糖溶液。各取5ml加入到不同的試管中，再分別加入DNS試劑5ml，加熱煮沸5min，取出置冷水中冷卻，在721型分光光度計(jì)上比色。（波長(zhǎng)為520nm，以濃度為0μg／ml的葡萄糖反應(yīng)液體作空白對(duì)照）。