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一 濾紙崩潰法1 原理 纖維素酶能分解濾紙，產(chǎn)生葡萄糖等還原糖，與3，5-二硝基水楊酸顯色劑作用，可生成橙黃色絡(luò)合物，用比色法能夠定量測定還原糖的生成量。本方法在最適條件下，以單位時間內(nèi)一定量的酶制劑釋放出的葡萄糖量，來表示纖維素酶制劑的活力。2 試劑2.1 3，5-二硝基水楊酸顯色劑稱取10g 3，5-二硝基水楊酸（熔點168-169℃，若熔點偏低，則應(yīng)重結(jié)晶，方法是稱取10g 3，5-二硝基水楊酸，加50mL水，加熱溶解，冷卻析出結(jié)晶，過濾，用冷水洗滌，干燥后得白色結(jié)晶），溶于蒸餾水中，加入20 g氫氧化鈉，200 g酒石酸鉀鈉，加水500 mL，加熱溶解后，加入重蒸酚2g、無水亞硫酸鈉0.5 g，加熱攪拌，待全部溶解后，冷卻，移到1000 mL容量瓶中，稀到刻度，放置一周后過濾備用。此顯色劑應(yīng)貯存于棕色瓶中。2.22.2 緩沖溶液0.04M，pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。33 方法3.13.1 酶液制備按工藝要求的濃度、pH值等配制酶處理液。3.23.2 酶解分別吸取酶處理液0、0.5、1.0、1.5、2.0mL，置于試管中，用pH值為4.5 的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液補足到2.0 mL。置于40℃水浴中保溫數(shù)分鐘后，在每管酶液中加入1×1cm2的新華1號層析濾紙6片，立即記時，準(zhǔn)確反應(yīng)60min，然后立即在沸水浴中加熱10min，使酶失活。3.33.3 顯色 在上述每管酶解液中，加入3 mL 3，5-二硝基水楊酸顯色劑，在沸水中加熱15 min，冷卻，加蒸餾水10 mL，搖勻，用分光光度計在550 nm波長下，用1 cm比色皿，以空白為對照，測定其光密度。以光密度為縱坐標(biāo)，各管酶濃度為橫坐標(biāo)作圖，應(yīng)成一通過原點的直線。取直線上任意一點計算即可。如成曲線關(guān)系（直線彎曲），應(yīng)將酶液進一步稀釋后再進行測定。3.43.4 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 準(zhǔn)確配制1000