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雙波長分光光度法測定x、y組分體系中X組分的濃度是從Y組分的吸收光譜曲線上選出具有相同吸光度的兩個波長，波長λ2(通常為測定波長)和波長λ1(參比波長)進(jìn)行波長組合。因此，波長組合 λ1和λ2的選取是方法的關(guān)鍵。
    對雙組分混合體系，所選擇的波長組合λ1、λ2必須符合兩個必要條件：(1)在這兩個波長處，共存組分應(yīng)具有相同的吸光度(等吸光度點)，即△A=0；(2)在這兩個波長處，待測組分的吸光度差值△A應(yīng)足夠大。波長組合λ1、λ2的選擇一般采用雙波長等吸光度點作圖法選定。以測定x．y兩組分混合體系中X組分為例，選擇x的最大吸收波長λ2為測定波長，從此點作波長軸的垂線，與Y的吸收光譜曲線交于一點，過此點作波長軸的平行線，與y的吸收光譜曲線相交于另外一點，即為等吸光度點。以此作為參比波長λ1，用此波長組合測定x、Y混合體系中X組分的含量時，測得的△A值與Y組分濃度無關(guān)。如果有多個等吸光度點，則應(yīng)選擇△A值較大，且波長差較小的兩波長組合，以提高測量的精密度。此外，測定波長也不一定在待測組分的最大吸收處，只要滿足△A足夠大即可。
    1．2．2 應(yīng)用實例
    范雪榮等對同時測定組合漿料中PVA和淀粉含量的雙波長分光光度法進(jìn)行了研究。參考PVA(10 m/L)和淀粉(80 mg／L)的吸收光譜曲線及雙波長等吸光度點作圖法，選取λ2= 624 nm，λ1=500 nm為測定混合組分中PVA的參比波長。
    顯色體系的選擇：硼酸介質(zhì)：40 g硼酸溶于1 L 水中，碘-碘化鉀溶液：升華過的碘l2．7 g及25 g 碘化鉀溶于蒸餾水中，稀釋至1 L。
    硼酸濃度對吸光度的影響：在其他條件不變的情況下，4％硼酸用量在6．00 mL～20．00 mL范圍內(nèi)，淀粉與碘形成的絡(luò)合物的吸光度基本不變，而 PVA與碘形成的絡(luò)合物的吸光度開始逐漸上升。
    硼酸用量在l2．00 mL-20．00 mL范圍內(nèi)，吸光度基本上不變。實驗選用4％ 硼酸溶液l5．00 mL。
    碘用量對吸光度的影響：碘溶液用量在2．00 mL～4．00 mL范圍內(nèi)時，PVA與碘形成絡(luò)合物的吸光度變化甚小，實驗選用2．00 mL碘-碘化鉀溶液。
    參考PVA和淀粉吸收光譜圖及雙波長等吸光度點作圖法，選取λ2=624／nm作為測定混合組分中 PVA的測定波長，選定參比波長λ1=500 nm。
    于奕峰等 對雙波長分光光度法測定退漿廢水中聚乙烯醇和淀粉濃度進(jìn)行了研究。
    顯色體系的選擇：硼酸介質(zhì)：24．72 g硼酸溶于 1 L水中，碘-碘化鉀溶液：升華過的碘12．7 g及25 g碘化鉀溶于蒸餾水中，稀釋至1 L。
    硼酸濃度對吸光度的影響：實驗結(jié)果表明，在其它條件不變的情況下，硼酸用量在5．00 mL～2O．00mL范圍內(nèi)，淀粉與碘形成的絡(luò)合物的吸光度基本不變，而PVA與碘形成的絡(luò)合物的吸光度逐漸上升，但硼酸量大時，PVA極易絮凝析出，故選擇硼酸用量為5．00 mL較佳。
    碘用量對吸光度的影響：碘溶液用量在2．00 mL～4．00 mL范圍內(nèi)時，PVA和淀粉與碘形成的絡(luò)合物的吸光度變化甚小，但碘溶液用量的增加使最大吸收波長紫移，綜合考慮選擇碘用量為2．00 mL 為宜。
    參考PVA和淀粉吸收光譜圖及雙波長等吸光度點作圖法，選取λ2=660 nm作為測定混合組分中 PVA的測定波長，選定參比波長λ1=500 nm。表2列出了兩位研究者應(yīng)用雙波長分光光度測量的操作條件及測量范圍。