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引言

含苯環(huán)類物質(zhì)在化學工業(yè)中具有廣泛的應(yīng)用，因此形成的工業(yè)廢水數(shù)量較多，且苯環(huán)類物質(zhì)對環(huán)境有一定毒害作用，對生物甚至有致癌致畸作用，因此，苯環(huán)類物質(zhì)的降解，是研究的熱門課題。生物降解是污染物質(zhì)降解常用的方法，苯環(huán)具有一定的生物降解性，因此，微生物降解含苯環(huán)物質(zhì)也有較多研究。

含苯環(huán)物質(zhì)的降解過程中，苯環(huán)的打開是評價降解情況的重要指標。因此，要評價一種微生物對污染物的降解能力，考察其生物酶對苯環(huán)的降解速率是關(guān)鍵，也就是降解苯環(huán)的酶活。現(xiàn)有酶活研究方法中，一般通過考察某個側(cè)基發(fā)色團的變化來判斷酶活力，但因每種物質(zhì)的發(fā)色團不同，導(dǎo)致這類測試方法不具有很好的普適性。有關(guān)直接采用苯環(huán)開環(huán)法來測定酶活的文獻尚未見報道。

針對現(xiàn)有酶活測試方法的局限性，本文提供一種微生物降解苯環(huán)的酶活測試方法，該測試方法具有很好地普適性和直接性，且簡便易行。

1實驗材料與方法

1.1材料

桿菌B-F：從廢水中分離獲得；各種化學試劑：從天津科密歐試劑公司購得。

1.2儀器與設(shè)備

空氣浴振蕩儀，生化培養(yǎng)箱，滅菌器，可見光分光光度計（VIS-723型，上海精密科學儀器有限公司），紫外分光光度計（UV2401，日本島津公司）

1.3培養(yǎng)基

微生物生長繁殖所需培養(yǎng)基應(yīng)包含其生長所需的微量元素和基本的碳源，本實驗中所用培養(yǎng)基為選擇性培養(yǎng)基，依靠對苯二甲酸（TA）提供碳源，并加入酵母浸出粉作為有機氮源，用于馴化微生物，并獲得較大量的菌體，使其具有更好的催化改性能力。具體成分如表1所示。

1.4方法

1.4.1制作含苯環(huán)底物（以下簡稱底物）濃度與吸光度之間關(guān)系的標準曲線：

配制一系列不同濃度的含苯環(huán)物質(zhì)溶液，并在紫外分光光度計上進行全波長掃描，進而確定不同濃度的含苯環(huán)物質(zhì)溶液的最大吸收波長，然后在其最大吸收波長下測定不同濃度的含苯環(huán)物質(zhì)溶液的吸光度，繪制底物濃度與吸光度之間關(guān)系的標準曲線圖，找出底物濃度與吸光度之間線性擬合度達到0.999以上的底物濃度范圍，擬合得到用于計算降解過程中苯環(huán)含量變化的線性方程；