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1.4.2配制底物溶液：

根據(jù)待測活力的酶或菌懸液的催化條件，配制底物溶液；所述的催化條件是指3-4g/L磷酸二氫鉀和6-7g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液，維持體系穩(wěn)定的pH值=6.8-7.0，最后加入含苯環(huán)的底物，包括對苯二甲酸或原兒茶酸等，配成1-2g/L的溶液。

研究表明，在所述催化反應液中，加入1-3g/L的酵母浸出粉作有機氮源，可有效催進微生物對碳源的消耗速率，從而提高酶活。

1.4.3催化反應：

將底物溶液和酶液預先分別加熱到各自最適反應溫度（例如37℃），然后將底物溶液和酶液混合為反應液，在最適反應條件是指溫度，轉(zhuǎn)速振蕩培養(yǎng)器的轉(zhuǎn)速等，例如：37℃，200r/min下，使之發(fā)生催化反應，并開始計時，經(jīng)過催化反應設(shè)定的時間，例如30min后，取出反應液，迅速高溫滅活，檢測底物濃度的變化；

1.4.4測定反應液中的苯環(huán)含量：

將上述催化反應前后的反應液稀釋相應倍數(shù)，例如50-100倍，使其吸光度在所述線性方程范圍內(nèi)；稀釋后的反應液在最大吸收波長下測試反應前后的吸光度，并根據(jù)所述線性方程計算反應前后的底物濃度。

1.4.5計算微生物降解苯環(huán)的酶活：

在本發(fā)明測試方法中，酶活的定義是：1ml酶液或菌懸液，在1min時間內(nèi)，降解1μmol含苯環(huán)物質(zhì)中的苯環(huán)，定義為一個酶活單位U/ml。依據(jù)下述公式（1），計算獲得微生物降解苯環(huán)的酶活：

酶活U=△C/M/△t×103      （1）

（1）式中，△C表示催化反應前后反應液中底物的濃度變化，單位為g/L；M表示底物的相對分子量，單位為g/mol，△t表示催化反應時間，單位為min；103為各個量的單位與規(guī)定酶活單位之間的校正量。

2實驗結(jié)果與分析

2.1標準曲線

采用磷酸鹽緩沖液（3g/L磷酸二氫鉀和7g/L的磷酸氫二鈉）配制濃度分別為1,2,5,10,20,30,40mg/L的對苯二甲酸溶液（標準溶液），在紫外分光光度計上對所配制的對苯二甲酸溶液進行全波長掃描，確定其最大吸收波長在240nm，然后在240nm波長下，測定所述不同濃度的對苯二甲酸溶液的吸光度，對應濃度-吸光度繪制的曲線圖（參見圖1），找出其線性擬合度達標（擬合度達到0.99986）的濃度范圍為1-40mg/L，擬合得到線性方程（2）：Y=0.08342+0.07584×X，其中X代表對苯二甲酸濃度，Y代表紫外吸光度，線性方程（2）用于計算對苯二甲酸降解過程中苯環(huán)含量的變化。

采用磷酸鹽緩沖液（4g/L磷酸二氫鉀和6g/L的磷酸氫二鈉）配制濃度分別為1,2,5,10,20,30,40mg/L的原兒茶酸溶液，全波長掃描，確定其最大吸收波長在250nm，在250nm波長下測定不同濃度溶液的吸光度，對應濃度-吸光度做出曲線圖（參見圖2），找出其線性擬合度達標（擬合度達到0.99971）的濃度范圍為1-40mg/L，擬合得到線性方程（3）：Y=0.07613+0.07579×X，其中X代表原兒茶酸濃度，Y代表紫外吸光度，線性方程（3）可用于計算原兒茶酸降解過程中苯環(huán)含量的變化。