將上述反應(yīng)前后的反應(yīng)液稀釋100倍,使之在線性方程的濃度范圍之內(nèi)。稀釋后的溶液在250nm波長下測試反應(yīng)前后吸光度分別為1.592和1.491。根據(jù)線性方程計(jì)算反應(yīng)前后對苯二甲酸濃度分別為2.000g/L和1.867g/L。
代入公式(1),酶活U=△C/M/△t×103,(其中M為154.12,△t為30)得到菌懸液酶活為:U=0.029。
2.5補(bǔ)加酵母粉為有機(jī)氮源,細(xì)菌TJ降解原兒茶酸的酶活
在催化反應(yīng)液中加入酵母粉作有機(jī)氮源可有效催進(jìn)微生物對碳源的消耗速率,從而提高酶酶活。為了確定酶活的提高程度,向反應(yīng)液中加入3g/L的酵母浸出粉,同時(shí)加入4g/L磷酸二氫鉀和6g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液,維持體系穩(wěn)定的pH值為7左右,最后加入原兒茶酸配成2g/L的溶液。
將底物溶液滅菌后加熱到37℃,將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中,混合均勻后,在37℃,200r/min振蕩反應(yīng),并開始計(jì)時(shí)。經(jīng)過30min后,取出反應(yīng)液,迅速95℃水浴滅活5min,檢測底物變化。
將上述反應(yīng)前后的反應(yīng)液稀釋100倍,使之在線性方程的濃度范圍之內(nèi)。稀釋后的溶液在250nm波長下測試反應(yīng)前后吸光度分別為1.592和1.388。根據(jù)線性方程計(jì)算反應(yīng)前后對苯二甲酸濃度分別為2.000g/L和1.731g/L。
代入公式(1),酶活U=△C/M/△t×103,其中M為154.12,△t為30)得到菌懸液酶活為:U=0.058。與2.4中結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),加入酵母粉可將菌懸液的酶活提高1倍多。
3結(jié)論
本測試方法采用菌懸液為催化介質(zhì),以含苯環(huán)物質(zhì)為底物,通過催化降解過程中苯環(huán)吸光度的變化,繪制出相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,經(jīng)過特定公式的計(jì)算,即可得出相應(yīng)的酶活數(shù)據(jù)。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明測試方法對于含苯環(huán)的物質(zhì)降解過程中酶活的檢測具有很好的普適性,適用于多數(shù)含苯環(huán)化合物的降解過程中酶活的直接測定,且測試過程簡單,不需要貴重儀器設(shè)備,非常適于實(shí)際測試使用。
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