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分子印跡聚合物可以被形象地描繪為識(shí)別“分子鑰匙”的“人工鎖”。近年來(lái)，分子印跡技術(shù)得到了蓬勃發(fā)展，分子印跡聚合物的形態(tài)由最初的塊狀發(fā)展到現(xiàn)在的印跡微球，合成環(huán)境由原來(lái)的有機(jī)相發(fā)展至現(xiàn)在的水相，印跡分子也從小分子發(fā)展為水溶性生物大分子。印跡微球不僅省去了研磨、篩分等步驟，還具有規(guī)則的形狀、較大的比表面積，可方便地用作色譜填料［1］。水相中制備分子印跡微球則主要是針對(duì)多肽、蛋白質(zhì)等生物分子的水溶性特征，這樣可以在不影響生物分子活性的條件下制備出具有選擇識(shí)別性的印跡聚合物。在水相中制備分子印跡聚合物的最大難點(diǎn)在于水分子會(huì)削弱印跡分子與功能單體之間的氫鍵作用，從而影響識(shí)別空穴的形成，因此研究在水相中制備并識(shí)別多肽類生物分子印跡聚合物，對(duì)藥物、環(huán)境和生物樣品的分析、純化意義重大［2，3］。

眾所周知，通過(guò)懸浮聚合［4，5］、沉淀聚合［6～9］和乳液聚合［10，11］等方法可以方便地制備出聚合物微球。然而，懸浮聚合制備的微球粒徑較大、分布較寬且不易控制，沉淀聚合則多在有機(jī)溶劑中進(jìn)行，唯有乳液聚合可在水相中制備出單分散性好的聚合物微球，因此，乳液聚合可用于水相中分子印跡聚合物微球的制備。

雙甘氨肽(Gly-Gly)是一種二肽類生物分子，可作為緩沖劑用于生物化學(xué)研究，在生產(chǎn)藥用針劑細(xì)作穩(wěn)定劑，在生物及醫(yī)藥研究中具有重要作用。本研究為保持Gly-Gly分子的生物活性，采用低溫氧化還原引發(fā)體系，通過(guò)乳液聚合在水相中制備了對(duì)Gly-Gly分子具有選擇識(shí)別性的分子印跡聚合物微球。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

雙甘氨肽(Gly-Gly，生化級(jí))，上海晶純科技有限公司;甲基丙烯酸甲酯(MMA，分析純)，天津科密歐化學(xué)試劑廠;丙烯酰胺(AM，分析純)、二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA，化學(xué)純)、Span80(化學(xué)純)、Tween80(化學(xué)純)，國(guó)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司;過(guò)硫酸鉀(KPS，分析純)、亞硫酸氫鈉(NaHSO3)，分析純)，西安試劑廠。FD-1型冷凍干燥箱，北京博醫(yī)康技術(shù)公司;ZetasizerNano型激光粒度分析儀，英國(guó)Malvern公司;H-600型透射電子顯微鏡，日本日立公司;722S分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.2 Gly-Gly-MIPMs的制備

將比例為1：3的Span80和Tween80復(fù)合乳化劑加入到25mL蒸餾水中，在室溫下預(yù)乳化20min。通N2除氧，依次滴加5mLMMA、1mmolGly-Gly和4mmolAM的預(yù)聚合溶液、1.5mLEDMA和2mLKPS，攪拌30min后升溫至45℃，加入1mLNaHSO3，反應(yīng)5h。將反應(yīng)所得的乳液在－25℃條件下冷凍干燥成粉末，依次用蒸餾水、10%乙酸的甲醇溶液洗滌，再經(jīng)超聲清洗處理30min，離心并棄去上清液。最后，將得到的MIPMs于60℃真空干燥至恒重備用?？瞻追肿佑≯E聚合物NMIPMs(不加印跡分子Gly-Gly)的制備方法與MIPMs相同。

1.3  Gly-Gly濃度的測(cè)定

雙甘氨肽分子由2分子甘氨酸縮合而成，因此可根據(jù)氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng)，采用分光光度法測(cè)定Gly-Gly的標(biāo)準(zhǔn)曲線［12］。一系列Gly-Gly溶液經(jīng)茚三酮顯色后測(cè)定其在570nm處的吸光度，經(jīng)擬合得到Gly-Gly溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)R=0.99937。未知Gly-Gly溶液的濃度則通過(guò)測(cè)定其顯色后在570nm處的吸光度，然后由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到該溶液的濃度。

1.4  Gly-Gly-MIPMs靜態(tài)吸附性能的測(cè)定

分別稱取制備的Gly-Gly-MIPMs和NMIPMs各0.20g置于錐形瓶中，加入20.00mL濃度為4mmol/L的Gly-Gly溶液，在室溫下振蕩吸附8h，然后取少量吸附液于離心管中，以4000r/min轉(zhuǎn)速離心10min，測(cè)定Gly-Gly的濃度。根據(jù)式(1)計(jì)算出Gly-Gly-MIPMs對(duì)Gly-Gly的單位吸附量。