羊膜上皮細胞的接種培養(yǎng)取生長良好的人羊膜上皮細胞Wish株（中國科學院上海細胞生物學研究所），生理鹽水漂洗兩次，加入025%胰蛋白酶消化后，培養(yǎng)液終止消化，離心，棄去液體，加入10%小牛血清的RPMI-1640雙抗（青霉素1105U/L，鏈霉素100mg/L）培養(yǎng)液稀釋成1107/L細胞懸液，接種5mL于已固定有纖維蛋白塊的培養(yǎng)瓶中，置入375%CO2恒溫培養(yǎng)箱（SHELL/JB）中培養(yǎng)。
形態(tài)學觀察倒置顯微鏡觀察采用倒置顯微鏡（Olympus），分別觀察各培養(yǎng)瓶內(nèi)纖維蛋白塊及人羊膜上皮細胞在纖維蛋白塊上生長情況。Giemsa染色倒置顯微鏡觀察接種人羊膜上皮細胞2d后，吸棄培養(yǎng)液，細胞用01mol/LPBS漂洗2次，用固定液（甲醇冰醋酸31）固定30min后，棄去固定液，Giemsa工作液染色20min，蒸餾水漂洗后，倒置顯微鏡下觀察并拍照。
掃描電子顯微鏡觀察接種羊膜上皮細胞培養(yǎng)2d后，吸棄培養(yǎng)液，01mol/LPBS漂洗細胞兩次，用01mol/LPBS配制的2%戊二醛固定液固定后，采用掃描電子顯微鏡（KYKYAMRAY1000B）觀察并拍照。
結果1Giemsa染色觀察纖維蛋白支架呈細網(wǎng)狀，較透亮，在不同視野纖維蛋白支架上均有人羊膜上皮細胞的生長，細胞多呈圓形。纖維蛋白支架Giemsa染色后變?yōu)殚冱S色，羊膜上皮細胞染色后呈紫藍色，細胞核藍色，隨細胞數(shù)目增多，藍色加深。
掃描電子顯微鏡觀察纖維蛋白支架的形態(tài)纖維蛋白支架呈不規(guī)則的立體空間結構，表面縱橫交錯，多層次網(wǎng)絡狀。羊膜上皮細胞形態(tài)羊膜上皮細胞生長較好，細胞呈凸起球狀物，絨毛狀。細胞之間有較長的偽足等多種形狀的接觸（4）。
討論近年來，由于生物材料具有可塑性強可吸收可降解以及不引發(fā)機體的免疫反應等特點，受到研究者廣泛的關注并不斷應用于臨床修補和細胞培養(yǎng)的載體。王一飛等<1>以血纖維蛋白凝塊及脂肪組織為支架構建三維組織模型培養(yǎng)巨噬細胞和3T3成纖維細胞，結果發(fā)現(xiàn)兩種細胞在支架上生長分化良好。
人羊膜上皮細胞間的細胞接觸已有的研究用于羊膜腔封閉的生物材料盡管能阻止羊水滲漏，但大多為機械性封閉作用<2-4>，封閉后是否能夠促進羊膜破口修復是更需要關注的問題，破口處的封閉物可能退縮或被降解，若其邊緣的羊膜上皮細胞能夠生長并修復胎膜破口，胎膜的完整性和組織學結構得以恢復，則可以達到最佳的治療效果。
人羊膜上皮細胞間的細胞接觸體外構建的纖維蛋白支架塊由纖維蛋白原纖維結合素因子復合物%因子凝血酶抑肽酶和鈣組成，是一種天然高分子材料，來源于哺乳動物（牛）和人血清，它是模仿血凝級聯(lián)反應的最后階段，形成穩(wěn)定的血凝塊，可對抗空氣或液體的通過；具有生物相容性，可吸收性無毒性等特點，特別是能快速形成，維持時間長，纖維蛋白溶解緩慢，我們研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶中的纖維蛋白塊置入CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，持續(xù)20d未見明顯降解，提供了羊膜上皮細胞在纖維蛋白支架生長增殖的充足時間。
[1][2]下一頁>>
相關信息 
推薦企業(yè) 推薦企業(yè)
推薦企業(yè)
編.gif)
您所在的位置：
