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摘要:從福建石獅錦尚和伍堡污水處理廠的曝氣池活性污泥中分離篩選到對堿性孔雀綠染料脫色能力強的7株高效菌株(B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7 ),并對7株細菌進行鑒定: B1菌株為庫特氏菌屬(Kurthia), B2菌株為假單胞菌屬(Pseudomonas), B3菌株為色桿菌屬(Chromobacterium), B4菌株為氣單胞菌屬(Aeromonas), B5菌株為節(jié)桿菌屬(Arthobacter), B6菌株為氧化產(chǎn)堿菌屬(Alealigenes), B7菌株為棒狀菌屬(Corynebacterium).

關(guān)鍵詞:堿性孔雀綠;脫色菌;分離;鑒定

隨著染料化學工業(yè)的迅猛發(fā)展,紡織、皮革、食品、日用化工等行業(yè)越來越多地應(yīng)用合成染料于生產(chǎn)中.我國的染料年產(chǎn)量達到15萬t[1],其中10%~15%會隨著廢水排入環(huán)境中[2].由于染料含有復(fù)雜的芳香環(huán)結(jié)構(gòu)、品種繁多、化學穩(wěn)定性高、生物可降解性低,且多數(shù)染料及其代謝中間產(chǎn)物具有致突變性、致癌性和其他毒性.染料廢水對環(huán)境的污染已是廣大環(huán)?？茖W工作者重點關(guān)注的問題之一.由于微生物具有繁殖速度快、適應(yīng)性強等特點,利用高效脫色微生物進行環(huán)境污染整治不僅成本低,且可減少二次污染的產(chǎn)生,因此,采用生物法對染料污染進行治理越來越受到人們的關(guān)注[3-5].目前已證實多種偶氮、蒽醌等結(jié)構(gòu)類型的染料均可被微生物降解,分離到的微生物主要包括細菌、真菌等.但對染料的微生物降解研究主要集中于偶氮染料[6-9],對于三苯甲烷類染料的研究報道較少.本文用三苯甲烷類染料堿性孔雀綠為試驗材料,以細菌對其脫色率為檢測指標,從福建石獅錦尚和伍堡污水處理廠不同的曝氣池活性污泥中分離篩選對堿性孔雀綠染料脫色能力強的高效菌株,并對分離到的株菌進行鑒定,為印染廢水的處理提供參考.

1· 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 分離樣品

采自福建石獅錦尚和伍堡污水處理廠不同曝氣池的活性污泥.   1.1.2 染料

采用三苯甲烷類的染料堿性孔雀綠,購自化工商店,浙江龍游第八化工廠生產(chǎn),最大吸收波長為617 nm.

1.1.3 培養(yǎng)基

富集培養(yǎng)基: KH2PO41.8 g, Na2HPO4·12H2O 3.5 g, MgSO4·7H2O 0.2 g, FeCl3·6H2O 0.01g,蛋白胨2.0 g,牛肉膏3.0 g,葡萄糖5.0 g,染料0.05 g,蒸餾水1 000 mL, pH7.0, 121℃滅菌20 min.

 生長培養(yǎng)基:蛋白胨10 g,牛肉膏3 g, NaCl 5 g,瓊脂15~20 g,蒸餾水1 000 mL, pH7.0~7.2, 121℃滅菌20 min.

染料培養(yǎng)基:蛋白胨10 g,牛肉膏3 g, NaCl 5 g,染料50 mg/L,蒸餾水1 000 mL, pH7.0~7.2,121℃滅菌20 min.

脫色培養(yǎng)基:麥芽糖3%,染料50 mg/L,硝酸銨1%.

染料固體培養(yǎng)基:染料培養(yǎng)基,瓊脂20 g, pH 7.0~7.2, 121℃滅菌20 min.

1.1.4 儀器

SPX-250B-Z生化培養(yǎng)箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),光學顯微鏡PM-10AD(Olympus),恒溫搖床HQ45 (武漢科學儀器廠),滅菌消毒器CRDX-280型(上海電安醫(yī)療器械廠),分光光度計723 (上海精密科學儀器有限公司),電子天平(上海精科天平廠),臺式離心機(上海安亭科學儀器廠), CS-15R冷凍高速離心機(Beckman),pHS-3C精密酸度計(上海雷磁儀器廠),SW-GF-1F潔凈工作臺(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠).

1.2 方法

1.2.1 富集及分離

從污水中取出5 mL的樣品,接入含50 mL富集培養(yǎng)基三角瓶中, 30℃靜置培養(yǎng)24 h,取出染料顏色有變化的三角瓶,取脫色菌液,經(jīng)適當稀釋涂布于含染料的固體分離培養(yǎng)基平板上, 30℃恒溫培養(yǎng)3~5 d,根據(jù)菌落形成的脫色圈,挑選出具有脫色能力的菌株,接種于含50 mg/L染料培養(yǎng)基培養(yǎng)3 d,后把脫色液涂布到牛肉膏蛋白胨瓊脂平板上, 30℃培養(yǎng)24 h,分離得單菌落.