顯色體系的選擇：硼酸介質(zhì)：4 g硼酸溶于1 L水中，碘-碘化鉀溶液：升華過的碘6．5 g及25 g碘化鉀溶于蒸餾水中，稀釋至1 L。將兩種溶液以體積比5：1混合。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法：配制100 mg／L-1 000 m LPVA系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入5．00 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液， 6．00 mL顯色劑，定容至30．00 mL，搖勻，顯色20 min，在690 nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
表1列出了以上幾位研究員應(yīng)用單波長分光光度測(cè)量的操作條件及測(cè)量范圍。
1．2 雙波長分光光度測(cè)定法
退漿廢水中一般都含有淀粉等其它組分，理論上可以根據(jù)PYA和淀粉與碘都能顯色，吸光度具有加和性，用單波長分光光度法同時(shí)測(cè)定，但對(duì)于淀粉和PVA吸收峰相互重疊的雙組分試樣，用單波長分光光度法必須解聯(lián)立方程，才能同時(shí)測(cè)定，計(jì)算繁瑣。采用雙波長分光光度法則比較簡單，可同時(shí)對(duì)吸收曲線部分重疊或完全重疊的多組分體系進(jìn)行快速測(cè)定。
1．2．1 原理
溶液中有兩種物質(zhì)，在兩個(gè)波長λ1、λ2狀態(tài)下測(cè)定出吸光度Al、A2，根據(jù)朗伯-比爾定律：
雙波長分光光度法測(cè)定x、y組分體系中X組分的濃度是從Y組分的吸收光譜曲線上選出具有相同吸光度的兩個(gè)波長，波長λ2(通常為測(cè)定波長)和波長λ1(參比波長)進(jìn)行波長組合。因此，波長組合 λ1和λ2的選取是方法的關(guān)鍵。
對(duì)雙組分混合體系，所選擇的波長組合λ1、λ2必須符合兩個(gè)必要條件：(1)在這兩個(gè)波長處，共存組分應(yīng)具有相同的吸光度(等吸光度點(diǎn))，即△A=0；(2)在這兩個(gè)波長處，待測(cè)組分的吸光度差值△A應(yīng)足夠大。波長組合λ1、λ2的選擇一般采用雙波長等吸光度點(diǎn)作圖法選定。以測(cè)定x．y兩組分混合體系中X組分為例，選擇x的最大吸收波長λ2為測(cè)定波長，從此點(diǎn)作波長軸的垂線，與Y的吸收光譜曲線交于一點(diǎn)，過此點(diǎn)作波長軸的平行線，與y的吸收光譜曲線相交于另外一點(diǎn)，即為等吸光度點(diǎn)。以此作為參比波長λ1，用此波長組合測(cè)定x、Y混合體系中X組分的含量時(shí)，測(cè)得的△A值與Y組分濃度無關(guān)。如果有多個(gè)等吸光度點(diǎn)，則應(yīng)選擇△A值較大，且波長差較小的兩波長組合，以提高測(cè)量的精密度。此外，測(cè)定波長也不一定在待測(cè)組分的最大吸收處，只要滿足△A足夠大即可。
1．2．2 應(yīng)用實(shí)例
范雪榮等對(duì)同時(shí)測(cè)定組合漿料中PVA和淀粉含量的雙波長分光光度法進(jìn)行了研究。參考PVA(10 m/L)和淀粉(80 mg／L)的吸收光譜曲線及雙波長等吸光度點(diǎn)作圖法，選取λ2= 624 nm，λ1=500 nm為測(cè)定混合組分中PVA的參比波長。
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