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應用氧化棉織物固定過氧化氫酶的研究

來源:印染在線 發(fā)布時間:2009年10月12日

厲成宣,范雪榮,王 強,王欽清(江南大學生態(tài)紡織教育部重點實驗室,江蘇無錫214122)

O 前言 生物酶具有催化專一、高效和反應條件溫和等特點,在發(fā)酵工業(yè)、制藥、生物傳感器、紡織印染等領域正發(fā)揮著越來越大的作用。然而,由于游離態(tài)酶對環(huán)境變化十分敏感,且反應后不能回收,在一定程度上限制了其應用發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn),將酶固定在合適的載體上就有可能解決上述問題,因此,對酶進行固定化是酶工程研究的核心內(nèi)容之一。過氧化氫酶(Catalase)能夠快速、高效地催化分解過氧化氫,目前主要應用于紡織品的生物除氧、生物傳感器、原料奶保鮮和廢水處理等方面。國內(nèi)外學者對于過氧化氫酶的固定化作了大量的研究,已經(jīng)報道的固定化材料有無機材料(礬土、硅酸鎂、磁體礦)和有機材料(殼聚糖、絲素蛋白、纖維素)等。 二醛基纖維素是纖維素衍生物的一種,具有良好的生物相容性、生物可降解性、環(huán)境友好和無毒等特點。目前,關于二醛基纖維素固定化葡萄糖氧化酶、固定化血紅蛋白和固定化脂肪酶的研究已有一定進展,固定化過氧化氫酶則尚未見報道。本課題主要利用棉織物與高碘酸鈉發(fā)生選擇性氧化反應生成2,3-二醛基纖維素,并以其為載體,通過纖維素上氧化產(chǎn)生的醛基與酶蛋白上的氨基發(fā)生交聯(lián)反應,以固定過氧化氫酶。1 試驗1.1材料和儀器 織物14.5 tex×14.5 tex 524根/10 cm x 284根/10 cm純棉平紋漂白織物 試劑過氧化氫酶(酶活40 000 U/mL,諾維信生物技術(shù)有限公司,工業(yè)品),高碘酸鈉、30%過氧化氫、鹽酸羥胺、氫氧化鈉、百里香酚藍、丙三醇、甲醇(均為分析純) 儀器uV-2280型紫外.可見分光光度計,PHS-2C型酸度計,WHYF-2F型全封閉水浴恒溫振蕩器1.2載體制備 將1.00g漂白棉織物浸入20 mL 0.05~0.20 mol/L的NaIO。溶液中,置于全封閉水浴恒溫振蕩器中,于2

5~50℃避光反應一定時間后,用0.10 mol/L的丙三醇溶液洗滌30 min,再用蒸餾水充分洗滌,以除去殘余的NaIO4,最后用濾紙吸干備用。1.3醛基含量測定 以甲醇為溶劑,百里香酚藍為指示劑,采用半微量鹽酸羥胺法,測定氧化棉織物的醛基含量。1.4過氧化氫酶的固定化 將上述制備的載體二醛基棉織物置于50 mL不同濃度的酶溶液中,于4℃反應數(shù)小時后,用蒸餾水充分洗滌,即得到固定化過氧化氫酶,室溫晾干,置于4℃的冰箱中貯存?zhèn)溆?。試驗中,以失活酶和載體反應作為空白樣。1.5過氧化氫酶活力的測定1.5.1 游離酶活力測定 采用改進的貝爾斯-西策爾斯(Beers&Sizers)法測定游離酶活力。

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